沙棘果粉体表抗氧化探讨全解_幼儿读物_幼儿训诫_训诫专区。沙棘果粉体表抗氧化探讨全解
沙棘果粉体表抗氧化活性的探讨 马宁安 耿春峰 何茂军 鲁平原 （青海圣烽生物手艺开荒有限公司，青海 西宁 810016） 摘要：采用差别措施测定沙棘果粉的抗氧化才力活性。实践前提下，沙棘果粉对 DPPH 自正在基、 超氧阴离子 O2-、羟基自正在基（· OH） 、过氧化氢 H2O2 有较强的清扫或箝造影响，且显示较好的 量效联系。是以沙棘果粉有用因素拥有较好的抗氧化影响。 环节词：沙棘果粉；抗氧化；FRAP 还原力；DPPH 自正在基；超氧阴离子；羟基自正在基 Study of antioxidant activity in sea-buckthorn powder （Qinghai Shengfeng biotechnology development co., LTD， Xining，810016） Adopting different determination methods, the activity of antioxidant capacity of sea buckthorn fruit powder was studied. Under experimental conditions, sea-buckthorn fruit powder has antioxidant capacity to DPPH, superoxide anion free radical O2 -, hydroxyl radicals (? OH), hydrogen peroxide H2O2, and shows good concentration relationship with activity of antioxidant capacity. Results show that sea-buckthorn fruit powder has good anti-oxidation active. 氧正在生物体内通过单电子还原形成化学性子伶俐的物质称为活性氧， 罗超氧阴离子自 由基、过氧化氢、羟基自正在基等，它们可能与多元不饱和脂肪酸影响，形成脂质过氧化，从 而诱发多种慢性疾病。抗氧化剂能有用清扫自正在基，延缓衰老和防御疾病。目古人们把抗氧 化探讨核心转向了自然、 高效的自然植物提取物上， 是以抗氧化活性评议措施对自然抗氧化 剂的探讨开荒至合紧要。 沙棘，是胡颓子科植物沙棘(Hippophae rhamnoides L.)的成熟果实，别名沙枣、醋柳、 黑刺。沙棘果中富含雄厚的维生素、黄酮、酸酚、超氧化物歧化酶及 ω-6 多不饱和脂肪酸等 养分因素和活性物质。今世医学探讨证据，沙棘果拥有抗衰老、清扫自正在基、抗辐射、提升 免疫力、抗肿瘤等影响。通过喷雾干燥手艺加工的沙棘果粉中含有维生素、黄酮、多糖、儿 茶素等多量自然抗氧化活性因素， 这些活性物质能与铅产生络合影响变成低毒或无毒络合物 排出体表，对骨和肝结构有显然促排铅影响，能抗氧化和消弭细胞膜上自正在基，可能淘汰机 体的氧化毁伤，是自然的抗氧化剂。 本试验以沙棘果粉为原料， 测定其重要成果因素的含量并以化学测定措施评议沙棘果粉 抗氧化活性评议编造， 从 FRAP （Ferric reducing antioxidant potential Assay） 总的抗氧化才力、 清扫 DPPH 自正在基、清扫 O2-、箝造· OH 等探讨沙棘果粉的抗氧化恶果，为沙棘果粉活性成 分的归纳使用供应依照。 １资料与措施 1.1 试验资料 1.1.1 试验原料 沙棘粉 1.1.2 试验试剂 DPPH（1，1－二苯基－２－三硝基苯肼） 、没食子酸丙酯（PG） 、硫酸亚铁、30%过氧 化氢、三羟甲基氨基甲烷（Tris） 、三氯乙酸、三氯化铁、铁氰化钾、盐酸、邻苯三酚、水 杨酸、无水乙醇等 1.1.3 试验仪器 分光光度计，PHS-25 数显 pH 计，TDD5M 型低速离心计。 1.2 试验措施 1.2.1 活性因素提取 称取 2.00ｇ沙棘果粉→蒸馏水浸泡 30min（料液比 1:16（m/v） ）→超声提取 30min，室 温提取 2 次→4000r/min 离心 5min→团结上清液→蒸馏水补重→低温避光，待用。 1.2.2 总抗氧化活性的测定—磷钼络合物法 配造浓度分袂为 1、2、3、4、5mg/mL 的样品溶液、PG 溶液。正在 10mL 比色管中， 分袂插足 4.0mL 磷钼试剂液、0.4mL 样品液，95℃水浴中恒温 90min，用紫表可见分光光 度计正在 695nm 波长下测吸光度 A。全部测定平行举行 3 次，取均匀值。 1.2.3 沙棘粉乙醇提取物还原力测定 取差别浓度乙醇提取液 2.5ｍＬ，个中插足 pH 为 6.6、浓度为 0.2mol/L 的磷酸缓冲液 2.5mL、１％的铁氰化钾溶液 2.5 mL，混匀后正在 50℃水浴加热 20min，取出缓慢冷却至室温 后增添 10％三氯乙酸 2.5 mL， 以 4000ｒ/min 离心 5min， 汲取上清液 5.0ｍＬ滴加 1.0 mL 0.1％ 三氯化铁、4.0 mL 蒸馏水，振荡混匀，15min 后于 700nm 测其吸光度值，反复试验 3 次。 1.2.4 对羟自正在基的清扫率测定 1.2.4.1 水杨酸法 鉴于 Fe ２＋ 氧化 H２O２形成的· OH 氧化水杨酸天生的有色编造正在 510nm 处有最大摄取， 当插足清扫· OH 的物质时，会与水杨酸比赛· OH，淘汰有色物质天生，消重吸光度值。使用 此道理， 本试验操动作： 汲取差别浓度乙醇提取液 2.0mL， 个中加 9.0mmol/L 的 FeSO４2.0 mL、 9.0mmol/L 水 杨 酸－乙 醇 液 2.0 mL、 8.8 mmol/L 的 H２O２2.0 mL、 蒸 馏 水 2.0 mL， 37℃ 水浴 30min 后正在 510nm 波长测吸光度值Ａｘ；用蒸馏水取代 H２O２，得本底摄取值Ａｘ0， 蒸馏水取代乙醇提取液，得空缺值Ａ0；该试验以蒸馏水做参比，反复试验３次。 羟自正在基清扫率预备公式： 清扫率（％）＝[Ａ0－（Ａｘ－Ａｘ0）]/Ａ0× 100％ 1.2.4.2 结晶紫法 结晶紫分光光度法测· OH 基础道理是：H2O2 和 Fe2+产生 Fenton 响应形成· OH。· OH 容 易打击高电子云密度点，会与结晶紫中拥有高电子云密度的 C=C 基团产生亲电加成响应， 而使结晶紫褪色。通过测定结晶紫吸光度值的蜕化可间接测定出· OH 的天生量。 由样品储藏液配造浓度为 1mg/mL 的样品溶液。正在 10mL 比色管平分袂插足 0.3mL 结晶紫、1.2mL FeSO4 溶液和 0.6mLH2O2 溶液。用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液(pH4.0)定容 到 10mL 并摇匀，安插 30min 后，正在 580nm 处测其吸光度 Ab(不加 H2O2 时 580nm 处的 吸光度为 A0)。则羟自正在基的形成量可能用 ΔA=Ao-Ab 来表征。 表观抗羟自正在基氧化率的测定： 正在上编造中加 H2O2 之前插足 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5mL 的样品溶液，测定其吸光度 As ，则表观抗羟自正在基氧化率 S 可能依据下述公式预备。 S(%)=(AS－Ab)/(A0－Ab)× 100 1.2.5 对超氧阴离子的清扫率测定。 本试验采用邻苯三酚自氧化法： 汲取 pＨ8.34、 浓度为 50mmol/L 的 Tris-HCL 溶液 4.5mL， 差别浓度乙醇提取液 1.0mL，混匀，37℃水浴 10min，然后分袂插足 0.5mL 6mmol/L 邻苯三 酚溶液响应 5min，终末插足浓度为 0.1mol/L 盐酸溶液 1.0mL 终止响应．经波长扫描，试液 正在 326nm 波利益有最大摄取，测得其吸光度值Ａｘ；用重蒸水取代乙醇提取液，得空缺值Ａ ０ ；用重蒸水取代邻苯三酚溶液得本底摄取值Ａｘ０；反复试验３次。 超氧阴离子清扫率预备公式： 清扫率（％）＝[Ａ０－（Ａｘ－Ａｘ０）]/Ａ０× １００％ 1.2.6 对ＤＰＰＨ自正在基的清扫率测定 ＤＰＰＨ是一种安静的人为合成自正在基，拥有榜样紫色，正在 517ｎｍ处有最大摄取，当 它与供应１个电子的自正在基清扫剂影响时天生无色产品，紫色变浅。 试验操作进程如下：汲取浓度为 0.1mg/mLＤＰＰＨ储藏液 4.0mL，差别质地浓度乙醇 提取液 1.0mL 混 匀， 于 室 温 避 光 显 色 30min， 正在 517nm 处测得吸光度值Ａｉ； 用 50％ 的乙醇取代提取液，测得吸光度值Ａ０；汲取 4.0mL 乙醇提取液，50％乙醇 1.0mL，测得吸 光度值Ａｊ；反复试验３次。 ＤＰＰＨ自正在基清扫率预备公式： 清扫率（％）＝[Ａ０－（Ａｉ－Ａｊ）]/Ａ０× １００％ 1.2.7 过氧化编造中抗氧化活性(AOA)的测定 配造浓度分袂为 1、2、3、4、5mg/mL 的样品溶液、PG 溶液。选用 1:25 的卵黄悬液 并汲取 0.2mL， 插足样品液 0.6mL， 插足 FeSO4 溶液， 用 PB 填充至 2.0mL， 37℃提拔 12h， 取出后加三氯乙酸(TCA)， 静置离心后汲取 2.0mL 上清液插足 TBA(硫代巴比妥酸)， 加塞， 放入开水浴中 15min，冷却后，于 532nm 处比色测定吸光值(A)，比照顾除不加提取液表， 其它试剂同前，所测吸光值为 A0，空缺管调零，样品及 箝造率（AOA）可能依据下述公式预备。 AOA(%)=(AO—A)/A0× 100 PG 对卵黄脂卵白脂质过氧化的 2.结果会商与说明 2.1 总抗氧化活性的测定 沙棘果粉总抗氧化活性测定结果见图 1。样品水溶液的抗氧化活性大于 PE 溶液的抗氧 化活性（p﹤0.05） ，样品乙醇溶液的抗氧化活性大于 PE 溶液的抗氧化活性（p﹤0.01） 。由 样品正在水溶液中的抗氧化性优于正在乙醇溶液中（p﹤0.05） ，样品抗氧化才力跟着样品浓度的 增长而巩固。 0.18 0.16 0.14 吸光值（ABS) 0.12 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0 1 2 样品乙醇溶液 PG溶液 样品水溶液 3 浓度（mg/mL) 4 5 图 1 沙棘总抗氧化活性测定结果 2.2 还原力的测定 沙棘粉还原力的测定结果见下图， 由图可见， 沙棘粉的还原力跟着浓度的增长还原力增 加。 0.3 0.25 吸光值（ABS) 0.2 0.15 0.1 0.05 0 1 2 3 浓度（mg/mL) 4 5 图 2 沙棘粉还原力测定结果 2.3 对羟自正在基的清扫率测定 2.3.1 水杨酸法 采用水杨酸法测定沙棘粉自正在基清扫率的结果见图 3, 沙棘果粉对羟基自正在基拥有较强 的清扫影响，浓度正在 1mg/mL~5 mg/mL 浓度周围内，清扫率从 15.43%增长到 59.29%，表露 浓度依赖性。 70 60 清扫率（%） 50 40 30 20 10 0 1 2 3 浓度（mg/mL) 4 5 图 3 水杨酸法测定沙棘粉自正在基清扫率的结果 2.3.2 结晶紫法 采用结晶紫法测定的沙棘粉自正在基清扫结果见图 4。结果阐明，沙棘果粉浓度正在 0.05mg/L 时，清扫率最大为 27.10%。 28 27 26 25 24 23 22 21 20 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 清扫率（%） 浓度（mg/mL)） 图 4 结晶紫法测定的沙棘粉自正在基清扫结果 2.4 对超氧阴离子的清扫率测定 沙棘粉清扫超氧阴离子的试验结果见图 5，由图 5 可见，沙棘果粉对超氧阴离子拥有较 强的清扫影响，正在 1mg/mL~5 mg/mL 浓度周围内，清扫率从 13.91%增长到 70.43%，表露浓 度依赖性。 80 70 60 清扫率（%） 50 40 30 20 10 0 1 2 3 浓度mg/mL 4 5 图 5 沙棘粉清扫超氧阴离子的试验结果 2.5 对 DPPH 自正在基的清扫率测定 沙棘粉对 DPPH 自正在基清扫率的试验结果见图 6， 由图 6 可见沙棘果粉对 DPPH 有较强 的清扫影响，正在浓度 3mg/mL 时清扫率最高为 69.95%，随后随浓度增长，清扫率没有显然 的增长趋向。 80 70 清扫率（%） 60 50 40 30 20 10 0 1 2 3 4 5 浓度（mg\mL) 图 6 沙棘粉清 DPPH 自正在基的试验结果 2.6 过氧化编造中抗氧化活性的测定 沙棘粉正在过氧化编造中的抗氧化活性测定结果见图 7，由图 7 可见，沙棘粉对对卵黄脂 卵白脂质过氧化物的箝造率可抵达 43%，随浓度的增长，箝造率没有显然变换。 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 1 2 3 4 5 箝造率（%） 浓度(mg/mL) 图 7 沙棘粉对卵黄脂卵白脂质过氧化物的箝造率 3. 结论 采用差别措施测定沙棘果粉的抗氧化才力活性。实践前提下，沙棘果粉对 DPPH 自正在 基、超氧阴离子 O2-、羟基自正在基（· OH） 、过氧化氢 H2O2 有较强的清扫或箝造影响，完全 显示较好的量效联系。是以沙棘果粉有用因素拥有较好的抗氧化影响。 4. 参考文件 [1]朱利娜,强伟,史俊勇,索有瑞.唐古特白刺果粉抗氧化影响探讨[J].食物工业科技;2006 年 05 期 [2]吴雪辉,黄永芳,高强,苏锦强,周薇,李昌宝.肉桂精油的抗氧化影响探讨[J].食物科技;2007 年 04 期 [3]程超,李伟.几种植物水溶液性多糖的体表抗氧化影响[J].中药药理与临床,2004,20(2):22-23 [4]章荣华,傅剑云,徐彩菊等.竹叶提取物抗氧化影响探讨[J].中药药理与临床,2004,20(2):22-23
