２０１８ 年 ９ 月第 ４７ 卷 第 ３ 期山 西 林 业 科 技ＳＨＡＮＸＩ ＦＯＲＥＳＴＲＹ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＳｅｐ? ２０１８Ｖｏｌ? ４７ Ｎｏ? ３区别提取要领对沙棘叶总黄酮含量的影响刘英翠 １ꎬ２(１. 山西省林业科学钻探院ꎬ山西 太原 ０３００１２ꎻ２. 国度林业局沙棘工程技能钻探中央ꎬ山西 太原 ０３００１２)摘 要: 对照区别提取要领对沙棘叶黄酮提取率的影响ꎬ琢磨最佳提取要领ꎮ 采用水回流提取法、乙醇回流提取法、酶辅帮乙醇提取法、超声辅帮乙醇提取法 ４ 种要领提取沙棘叶黄酮ꎬ操纵分光光度法测定沙棘叶总黄酮含量ꎮ区别提取法提取沙棘叶总黄酮含量的巨细为:乙醇回流提取法 酶辅帮乙醇提取法 超声辅帮乙醇提取法 水回流提取法ꎮ 由此可知...
２０１８ 年 ９ 月第 ４７ 卷 第 ３ 期山 西 林 业 科 技ＳＨＡＮＸＩ ＦＯＲＥＳＴＲＹ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＳｅｐ? ２０１８Ｖｏｌ? ４７ Ｎｏ? ３区别提取要领对沙棘叶总黄酮含量的影响刘英翠 １ꎬ２(１. 山西省林业科学钻探院ꎬ山西 太原 ０３００１２ꎻ２. 国度林业局沙棘工程技能钻探中央ꎬ山西 太原 ０３００１２)摘 要: 对照区别提取要领对沙棘叶黄酮提取率的影响ꎬ琢磨最佳提取要领ꎮ 采用水回流提取法、乙醇回流提取法、酶辅帮乙醇提取法、超声辅帮乙醇提取法 ４ 种要领提取沙棘叶黄酮ꎬ操纵分光光度法测定沙棘叶总黄酮含量ꎮ区别提取法提取沙棘叶总黄酮含量的巨细为:乙醇回流提取法 酶辅帮乙醇提取法 超声辅帮乙醇提取法 水回流提取法ꎮ 由此可知ꎬ区别要领沙棘叶黄酮的提取率存正在明明分歧ꎬ个中ꎬ乙醇回流法的提取率最高ꎬ但时耗长ꎻ而酶辅帮乙醇提取法黄酮提取率也较高ꎬ且拥有操作单纯、省时、溶剂用量少、耗能低等便宜ꎬ可认为工业化提取沙棘叶黄酮供给参考ꎮ合节词: 沙棘叶ꎻ 黄酮ꎻ 提取要领ꎻ 提取率中图分类号: Ｓ７９３. ６ 文件标识码: Ａ 著作编号:１００７￣７２６Ｘ(２０１８)０３￣００２１￣０３Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｎ Ｔｏｔａｌ ＦｌａｖｏｎｏｉｄｓＣｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ Ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌｉｎｎ. ＬｅａｖｅｓＬｉｕ Ｙｉｎｇｃｕｉ １ꎬ２(１. Ｓｈａｎｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｔａｉｙｕａｎ ０３００１２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ２. Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ Ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｂｕｒｅａｕꎬ Ｔａｉｙｕａｎ ０３００１２ꎬ Ｃｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ. Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｗａ￣ｔｅｒ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄꎬ ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄꎬ ｅｎｚｙｍｅ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄꎬ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｉｅｌｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ. Ｔｈｅｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｉｎ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｌｅａｖｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｔｕｒｎ ｗｅｒｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｍｅｔｈ￣ｏｄ ｅｎｚｙｍｅ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｔｅｒ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ.Ｔｈｕｓꎬ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｌｅａｖｅｓ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｅｘ￣ｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｂｕｔ ｔｉｍｅ￣ｃｏｎｓｕｍｉｎｇ. Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｌｓｏ ｈｉｇｈｅｒꎬ ｍｅａｎｗｈｉｌｅ ｉｔ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅꎬ ｔｉｍｅ￣ｓａｖｉｎｇꎬ ｌｅｓｓ ｓｏｌｖｅｎｔ ａｎｄ ｌｉｔｔｌｅ ｅｎｅｒｇｙꎬ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏ￣ｖｉｄｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｌｅａｖｅｓ.Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌｉｎｎ. ｌｅａｖｅｓꎻ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎻ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓꎻ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ收稿日期: ２０１８￣０６￣１３基金项目: 山西省林业科技革新项目(２０１７ＬＹ０３)作家简介: 刘翠英(１９７４ )ꎬ女ꎬ河北广宗人ꎬ２００５ 年结业于北京林业大学ꎬ工程师ꎮ１ 原料与要领１. １ 原料１. １. １ 试材试验所用沙棘叶采自山西省右玉县ꎬ干燥打破后过 ８０ 目筛密封备用ꎮ１. １. ２ 仪器超声波洗涤器(ＫＱ￣２００ＶＤＥ)ꎬ紫表可见分光光度计(上海仪电 ＵＶ￣７５２Ｎ)ꎬ阐发天平(ＡＥＧ￣８０ＳＭ)ꎬ离心绪(Ｃｅｎｔｒｉｓａｒｔ Ｄ￣１６Ｃ)ꎬ水浴锅(ＣＳ５０１)ꎬ电热胀风干燥箱(ＧＺＸ￣９０７０ＭＢＥ)ꎮ１. １. ３ 试剂芦丁法式品(成都思科华生物技能有限公司)ꎬ乙醇、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸钠等试剂(阐发纯)ꎬ复合酶(由纤维素酶与果胶酶构成)ꎮ１. ２ 要领 ２２ 山 西 林 业 科 技 ２０１８ 年１. ２. １ 法式溶液的配造切确称取芦丁法式品 １０ ｍｇꎬ用 ３０％ 乙醇熔解并定容于 ５０ ｍＬ 容量瓶中ꎬ得浓度为 ０. ２ ｍｇ/ ｍＬ 的芦丁法式品溶液ꎮ１. ２. ２ 法式弧线的绘造判袂汲取芦丁法式品溶液 ０ ｍＬꎬ１ ｍＬꎬ２ ｍＬꎬ３ ｍＬꎬ４ ｍＬꎬ５ ｍＬꎬ６ ｍＬ 于 ２５ ｍＬ 容量瓶中ꎬ各加３０％乙醇至 ６ ｍＬꎬ插足 ５％ ＮａＮＯ ２ 溶液 １ ｍＬꎬ摇匀静置 ６ ｍｉｎ. 再插足 １０％ Ａｌ(ＮＯ ３ ) ３ 溶液 １ ｍＬꎬ摇匀静置 ６ ｍｉｎ. 再加 ４％ ＮａＯＨ 溶液 １０ ｍＬꎬ结尾用３０％乙醇定容至刻度ꎬ摇匀静置１５ ｍｉｎ. 以试剂行为空缺参比ꎬ正在最大汲取波长 ５００ ｎｍ 处测定吸光度(见表 １)ꎮ 以吸光度为纵坐标ꎬ浓度为横坐标ꎬ绘造法式弧线)ꎬ取得回归方程:ｙ ＝１１. ６９１ ０ ｘ ＋０. ００７ ８ꎬＲ ２ ＝０. ９９９ ７.表 １ 芦丁法式弧线测天命据法式溶液/ ｍＬ溶液浓度/ (ｇ?ｍＬ－１ )吸光度１.０ ０.００８ ０.１０４ ８２.０ ０.０１６ ０.１９２ ７３.０ ０.０２４ ０.２８８ ２４.０ ０.０３２ ０.３７８ ６５.０ ０.０４０ ０.４７３ ４６.０ ０.０４８ ０.５７３ ０芦丁溶液浓度 /? （gmL -1 ）0.010.70.60.50.40.30.20.10.0◆◆◆◆◆0.03 0.05吸光度图 １ 芦丁法式弧线 水回流提取法切确称取干燥的沙棘叶粉末 ２ ｇ 于烧瓶中ꎬ插足蒸馏水 ３０ ｍＬꎬ水浴回流提取 ２ 次ꎬ每次 ２ ｈꎬ提取温度８５ ℃. 统一２ 次滤液于１００ ｍＬ 容量瓶中ꎬ用蒸馏水定容至刻度ꎬ即得供试溶液 Ａ.１. ２. ３. ２ 乙醇回流提取法准确称取干燥的沙棘叶粉末 ２ ｇ 于烧瓶中ꎬ插足 ６０％乙醇３０ ｍＬꎬ水浴回流２ 次ꎬ每次２ ｈꎬ水浴温度 ６０ ℃ꎬ冷却后过滤ꎮ 汇集滤液于 １００ ｍＬ 容量瓶中ꎬ残渣用 ６０％ 乙醇洗涤ꎬ洗液并入容量瓶中ꎬ用６０％乙醇定容至刻度ꎬ摇匀ꎮ 量取 ２５ ｍＬ 液体置于５０ ｍＬ 的容量瓶中ꎬ加蒸馏水至刻度ꎬ摇匀ꎬ即得６０％乙醇回流提取液 Ｂ.１. ２. ３. ３ 酶辅帮乙醇提取法准确称取沙棘叶粉末 ２ ｇ 于烧瓶中ꎬ插足 ６０％乙醇 ３０ ｍＬꎬ酶用量为沙棘叶质料的 ４％ꎬ置热水浴中 １２０ ｍｉｎꎬ温度 ５０ ℃ꎬ冷却后过滤于 １００ ｍＬ 容量瓶中ꎮ 残渣用 ６０％ 乙醇洗涤ꎬ洗液并入容量瓶中ꎬ用 ６０％乙醇定容至刻度ꎬ摇匀ꎮ 取 ２５ ｍＬ 液体置于５０ ｍＬ 的容量瓶中ꎬ加蒸馏水至刻度ꎬ摇匀ꎬ即得酶辅帮乙醇提取液 Ｃ.１. ２. ３. ４ 超声辅帮乙醇提取法准确称取沙棘叶粉末 ２ ｇ 于烧瓶中ꎬ按液料比１０∶１ 插足 ６０％ 乙醇后举行超声波收拾ꎬ超声功率８０ Ｗꎬ提取温度 ５０ ℃ꎬ 提取时分 ６０ ｍｉｎ. 离心１０ ｍｉｎꎬ用滤纸过滤于 １００ ｍＬ 容量瓶中ꎬ残渣用６０％乙醇洗涤ꎬ洗液统一于容量瓶中ꎬ用 ６０％ 乙醇定容ꎮ 取 ２５ ｍＬ 置于５０ ｍＬ 的容量瓶中ꎬ加蒸馏水至刻度ꎬ摇匀ꎬ即得超声辅帮乙醇提取液 Ｄ.１. ２. ４ 样品含量的测定判袂量取供试品溶液 ＡꎬＢꎬＣꎬＤ 各 １. ５ ｍＬ 于２５ ｍＬ 容量瓶中ꎬ插足 ３０％乙醇 ４. ５ ｍＬꎬ５％ 亚硝酸钠 １ ｍＬꎬ摇匀ꎬ静置 ６ ｍｉｎ. 后加 １０％ 硝酸铝 １ ｍＬꎬ混匀ꎬ安顿 ６ ｍｉｎ. 再插足 ４％ 氢氧化钠 １０ ｍＬꎬ用３０％乙醇定容至刻度ꎬ摇匀ꎬ安顿 １５ ｍｉｎ. 用紫表分光光度法于波长 ５００ ｎｍ 处测定吸光度ꎬ推算黄酮提取率ꎮ 每种提取要领做 ３ 次平行试验ꎬ取均匀值ꎮ２ 结果与阐发４ 种提取法所得沙棘叶总黄酮含量及提取率见表 ２ 和第 ２３ 页图 ２.表 ２ 区别提取法沙棘叶黄酮的提取率提取要领提取时分/ ｍｉｎ黄酮含量/ (ｍｇ?ｇ－１ )黄酮均匀含量/ (ｍｇ?ｇ－１ )提取率/ ％水回流提取法 ２４０乙醇回流提取法 ２４０酶辅帮乙醇提取法 １２０超声辅帮乙醇提取法 ６０２４.８９２４.９８２７.４０７４.３５７７.７１７５.４０６４.１２６６.５３７１.９４４８.２５４５.６３４５.２３２５.７５ ２.５７７５.８２ ７.５８６７.５３ ６.７５４６.３７ ４.６３ 第 ３ 期 刘英翠:区别提取要领对沙棘叶总黄酮含量的影响 ２３ 提取要领9876543210提取率 /%水回流法 乙醇回流法酶辅帮乙醇法超声辅帮乙醇法图 ２ 区别提取法沙棘叶黄酮的提取率对照由表 ２ 和图 ２ 可知ꎬ乙醇回流法黄酮提取率最高ꎬ为 ７. ５８％. 该要领本钱较低ꎬ提取率高ꎬ但提取时分太长ꎮ 水回流法提取黄酮杂质较多ꎬ如无机盐、卵白质、糖等ꎬ因而提取率最低ꎬ为 ２. ５７％. 溶剂回流提取法合键是操纵乙醇和水的扩散、分泌效用ꎬ慢慢通过沙棘叶细胞壁分泌到细胞内ꎬ将黄酮类物质溶出ꎮ 而黄酮类化合物易溶于乙醇等有机溶剂ꎬ正在乙醇中的熔解度大于正在水中的熔解度ꎬ乙醇能够将黄酮类物质近于一律溶出ꎮ 所以ꎬ乙醇回流法提取到的黄酮含量最高ꎮ酶辅帮乙醇法黄酮提取率为 ６. ７５％ꎬ略低于乙醇回流法ꎮ 这是因为酶拥有埋头性ꎬ复合酶可正在纤维素酶、果胶酶等的协同效用下ꎬ捣乱沙棘叶的细胞壁ꎬ使细胞内的黄酮类物质裸显现来ꎬ有利于次生代谢产品黄酮类物质的熔解ꎮ 酶辅帮乙醇法提取沙棘叶总黄酮是一种较新的提取要领ꎬ提取率比守旧的乙醇回流法略低ꎬ但该法可省略有机溶剂应用量ꎬ简化提取流程ꎮ超声辅帮乙醇提取法黄酮的提取率为 ４. ６３％ꎬ低于酶辅帮乙醇提取法ꎮ 超声辅帮合键是操纵超声波发作的激烈流动、高速的空化效应和搅拌效用ꎬ捣乱沙棘叶细胞ꎬ使提取液乙醇分泌到沙棘叶细胞内ꎬ加快黄酮类物质的浸出ꎮ 由表 ２ 能够看出ꎬ超声波提取法大大节流了提取时分ꎬ是溶剂回流提取时分的 １/４ꎬ且拥有有机溶剂用量少的特性ꎬ但提取率较乙醇回流与酶辅帮乙醇提取法低ꎮ３ 结论 钻探剖明ꎬ区此表提取要领直接影响着沙棘叶黄酮的提取率ꎮ 守旧的乙醇回流法对沙棘叶总黄酮的提取率最大ꎬ拥有设置单纯、提取率上等便宜ꎬ但溶剂耗费量大ꎬ耗时耗能ꎬ且过高的水浴温度是否对黄酮活性因素形成捣乱尚有待进一步钻探ꎮ 酶辅帮乙醇法提取沙棘叶总黄酮拥有提取率高、操作单纯ꎬ省时省力、溶剂用量少、耗能低、易于工业化等便宜ꎮ因而ꎬ生物酶法正在沙棘叶黄酮提取上拥有明明上风ꎬ这将为沙棘叶的开辟操纵供给新的要领和思绪ꎬ为此后坐蓐沙棘叶黄酮供给优越的工业化远景ꎮ阐发得出酶辅帮乙醇法提取沙棘叶黄酮的最佳试验前提为:酶与沙棘叶质料比为 １∶ ０. ０４ꎬ水浴温度 ５０ ℃ꎬ提取时分 １２０ ｍｉｎꎬ乙醇浓度 ６０％ꎬ提取次数 １ 次ꎮ 正在此前提下沙棘叶黄酮提取率为 ６. ７５％.参考文件:[１] 刘 勇ꎬ廉永善ꎬ王颖莉ꎬ等. 沙棘的钻探开辟评述及其紧要事理[Ｊ]. 中国中药杂志ꎬ２０１４ꎬ３９(９):１ ５４７￣１ ５５２.[２] 侯 霄ꎬ万 强ꎬ付永峰ꎬ等. 山西百般沙棘叶总黄酮的含量测定[Ｊ]. 国际沙棘钻探与开辟ꎬ２０１４ꎬ１２(１):６￣９.[３] 彭 游ꎬ汤 明ꎬ胡幼铭ꎬ等. 沙棘黄酮提取希望[Ｊ].自然产品钻探与开辟ꎬ２０１２ꎬ２４(４):５６２￣５６７ꎻ４６８.[４] 郑 京. 沙棘叶中总黄酮的提取与测定[Ｊ]. 江苏化工ꎬ２００８ꎬ３６(１):３６￣３８.[５] 刘树英ꎬ郑 涛ꎬ刘俊男ꎬ等. 沙棘黄酮提取要领对照钻探[ Ｊ]. 安 徽 农 业 科 学ꎬ ２００９ꎬ ３７ (２４): １１ ５５１￣１１ ５５２ꎻ１１ ５５７.[６] 邸多隆ꎬ刘晔玮ꎬ王 勤ꎬ等. 沙棘叶总黄酮提取工艺钻探[Ｊ]. 中药材ꎬ２００６ꎬ２９(９):９７９￣９８１.[７] 姜少娟ꎬ马养民ꎬ孔东宁ꎬ等. 超声波法提取沙棘果渣中总黄酮的最佳工艺钻探[Ｊ]. 西北农林科技大学学报ꎬ２００６ꎬ３４(１０):１８４￣１８８.[８] 李淑珍ꎬ武 飞ꎬ陈月林ꎬ等. 沙棘叶总黄酮含量测定要领的设备[Ｊ]. 西北师范大学学报ꎬ２０１５ꎬ５１(９):９４￣９７ꎻ１０４.
